Semana 10 (17 de Julio)

Nosotros ya teníamos el gel preparado de la semana pasada. Hoy nos encargamos de largar la corrida electroforética propiamente dicha:
Nosotros sabíamos que nuestra cantidad de proteínas por unidad de volumen era:

Entonces sabiendo que se desea sembrar siempre la misma cantidad de proteínas, para que en la corrida, la diferencias esten dadas por las diferente composición de las muestras o las diferentes situaciones experimentales y no por la cantidad sembrada. Entonces de todos estos se siembra solo 40 ug de proteínas. El volumen que se deberá sembrar de cada uno para llegar a los 40 ug será:

Entonces el volumen total de siembra para cada caso será:

Luego a cada uno se le debe agregar un volumen de buffer Laemmli que equivalga a la cuarta parte del volumen de cada muestra; en este caso:

Entonces el volumen total de siembra para cada caso será:

Una vez hecho esto se lleva a ebullición para desnaturalizar por completo a las proteínas, y de esta forma asegurarse que las diferentes bandas que vayan a dar en la electroforesis se deba al peso molecular de la proteína y no a su forma globular u otra estructura terciaria que haga que el resultado en verdad difiera. Las proteínas deben tener únicamente su estructura primaria, es decir, su cadena extendida de aminoácidos, la cadena polipeptídica.

Habiendo realizado los pasos previos, introdujimos el gel en la cuba electroforética para la posterior realización de la corrida.

El gel esta armado de tal manera que nos quedan 4 calles con la siembra de nuestras 4 muestras y la primera calle con el marker (mezcla de proteínas con peso molecular conocido, del cual se siembran solo 5 ul):

El voltaje inicial con el cual se debe comenzar la electroforesis es de 50 V. Luego de que la corrida haya pasado el Stacking, el voltaje se cambia a 100V
Lamentablemente no pudimos sacar una foto del gel listo, sin embargo un dibujo de lo observado sería:

Este mismo día operamos 2 animales realizando una compresión nerviosa en cada uno para poder dejarlos 7 días de sobrevida y luego analizar los cambios ocurridos; para esto debimos hacer el mismo procedimiento que con la extracción del nervio pero con el animal vivo, anestesiado y cuidando al esterilidad del proceso para que la injuria sea exitosa, ya que de haber muerto el animal, habría sido en vano.